商品描述
规格参数
保障声明

· 储存条件 : 室温保存

· 单位 : 盒

产品内容：

试剂Ａ 200mL

试剂D 200mL

样本稀释液（赠品） 200mL

清洗液（赠品） 200mL

保存：18℃-25℃保存，有效期两年。本品易感染细菌，需无菌条件下操作。无菌条件下操作，启封后常温保存。如4℃保存，本分离液易出现白色结晶，影响分离效果。

操作步骤：

全过程样本、试剂及实验环境均需在20±2℃的条件下进行。首先取抗凝血按体积比1:1的比例加全血及组织稀释液混匀，根据稀释后的样本量大小，分以下两种情况：

情况A: 稀释后血液样本小于5mL时，实验方法如下：

1. 取一支15ml离心管，依次小心加入试剂A、试剂D（体积比为3:2，试剂总量与稀释后的血液样本量相等。如稀释后的血液样本为5ml，则先后加入试剂A 3ml、试剂D 2ml），制成梯度界面，各液面分层一定要清晰。

2. 用吸管小心吸取稀释后的血液样本加于分离液液面上，400-550g，离心20-30min（注：根据血液样本量确定离心条件，血液样本量越多，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到最佳分离效果）。

3. 离心后，此时离心管中由上至下分为五层。第一层为稀释液层。第二层为透明试剂D液层。第三层为环状乳白色单核细胞层。第四层为透明试剂A液层。第五层为红细胞层。

4. 用吸管小心吸取第二层试剂D层和第三层乳白色细胞层到另一15ml离心管中，往所得离心管中加入10ml清洗液，混匀细胞。

5. 250g，离心10min。

6. 弃上清。

7. 用吸管以5ml清洗液重悬所得细胞。

8. 250g，离心10min。

9. 重复6、7、8，弃上清后以0.5ml后续实验所需相应液体重悬细胞。

10. 差异贴壁法纯化细胞

（1）用单核细胞无血清培养基或单核细胞完全培养基以1.5-3×10⁶个/ml的密度重悬细胞，将细胞铺于一次性细胞板或细胞瓶中，放于37℃二氧化碳培养箱中进行贴壁培养。

（2） 2-4小时内贴壁的为巨噬细胞前体（俗称为单核细胞）。

（3） 10-24小时内贴壁的单个核细胞为内皮、内皮祖细胞、干细胞。

（4）不贴壁的为淋巴细胞。

注：

a) 无血清培养基中不含任何动物成分，为得到更佳培养效果可添加10%自体血浆或2-8%的胎牛血清。

b) 完全培养基中含2-20%胎牛血清（血清具体含量由所培养的目的细胞而定）。

c) 由于每种细胞的贴壁时间存在差异可将所得细胞分开已达简单的纯化目的，此法成本相对较低。如需获得高纯度目的细胞则需在使用分离液后选用免疫磁珠阳性或阴性分选。

情况B: 血液样本大于等于5mL时，实验方法如下：

1. 取一支适当的离心管，依次小心加入试剂A、试剂D（试剂A与试剂D体积比为5:3，试剂总量与稀释后的样本量相等），制成梯度界面。

2. 将经稀释后的血液样本小心加于分离液之液面上，450-650g（最大离心力可至1000g），离心20-30min。（注：根据血液样本量确定离心条件，血液量越多，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到最佳分离效果。加入血液样本后，样本及分离液总体积不得超过离心管总体积的三分之二）。

3. 剩余步骤同“情况A”中步骤3至步骤10。

注意事项：

1. 全过程样本、试剂及实验环境均需在20±2℃的条件下进行。为获得最佳的实验结果，最好在取血2h内进行实验，血液存放时间越长，细胞分离效果越差。血液放置超过6h后分离效果更差甚至不能达到分离目的。

2. 稀释后血液样本体积小于3ml时，试剂A和试剂D用量分别为2ml和1ml。

3. 本实验最好不要使用高聚合材质（如聚苯乙烯）的塑料制品，应使用无静电、低静电离心管及未经碱处理过后的玻璃制品，因为静电作用将导致细胞贴壁、碱处理的玻璃表面会变成毛面，影响细胞分离效果。

4. 吸取过多的单核细胞层及分离液层会导致分离液交界处的粒细胞被吸出从而使混杂的粒细胞数量增加。

5. 吸取过多的单核细胞层上层溶液会导致血浆蛋白及血小板混杂。

浓度
规格	200ml/KIT
保存	室温保存

保障声明

正品保障

四面体向您保证所售商品均为正品行货，开具正规发票。

注：因厂家会不提前通知的情况下更改产品包装、附件或产地，本司不能确保客户收到的货物与本网站的图片、产地、附件说明完全一致。只能确保为原厂正货！并且保证与当时市场上同品牌同型号的主流产品一致。若本网站没有及时更新，敬请谅解！

售后保障

四面体产品在使用过程中如因产品质量问题有“退换返修”的需求，您可在用户中心提交您的售后申请，四面体客服会第一时间为您处理，在售后服务过程中如遇到问题也可致电四面体客服热线：400-051-0051。

1、7天无理由退货

您购买的四面体商品7日内（含7日，自物流系统反馈签收之日起计算），商品如由于质量原因导致无法使用，或无法通过技术维修恢复正常使用功能，您有权要求四面体平台进行退货，退货运费由四面体平台承担；由于客户自身原因造成的退货，运费由客户自行承担。

2、15天内可换货

您购买的四面体商品15日内（含15日，自物流系统反馈签收之日起计算）由于客户自身原因造成的换货，运费由客户自行承担；产品技术性能决定无法更换的产品不属于可更换范围内。

3、关于维修

您所购买的仪器设备在质保期内发生因产品质量问题无法使用，四面体平台进行免费维修服务；非质保期内的维修需要另外收取维修费用。

4、关于质保期

所有商品质保期都以生产厂家所列质保期为准。

友情提示：建议产品外包装、附件、赠品自收货之日起保留15日，退换货时附商品的原外包装。

权利声明

四面体上的所有商品信息（包括但不限于商品图片、商品介绍、产品视频及文档）、产品咨询信息，是四面体重要的经营资源，未经许可，禁止非法转载及使用。